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Efecto de inhibidores de la fosforilación de proteínas sobre el aumento en el calcio interno inducido por despolarización de las terminales nerviosas
(1992) Sitges, María; Talamo Bárbara; Departamento de Neuroquímica, Instituto Mexicano de Psiquiatría, Calz. México-Xochimilco 101, Col. San Lorenzo huipulco, 14370 México, D.F.
El posible papel de las quinasas en la regulación de los niveles del CA2+ libre Citosólico (Cai) en las terminales nerviosas, se investigó estudiando el efecto de varios inhibidores de quinasas sobre el aumento en el Cai inducido por despolarización con alto K+ en sinaptosomas de cerebro de rata. El CA2+ intrasinaptosomal se detectó con el marcador fluorescente sensible a CA2+ fura-2. El H-7 (100 µM), la estaurosporina ( I µM) y el compuesto K-252a, que inhiben a la proteína cinasa C (PKC) y a las proteínas quinasas dependientes de nucleótidos cíclicos interactuando con el sitio activo de las enzimas, no inhiben a la PKC uniéndose al dominio regulatorio de la enzima y que también se unen a calmodulina (CaM), inhibieron marcadamente el aumento en el Cai que induce el K+ alto. Estos resultados indican que la inhibición de la PKC no es suficiente para bloquear el incremento en el Cai que induce la despolarización con alto K+. Los antagonistas de CaM, en cambio, deben bloquear el aumento en el Cai que induce el alto K+, inhibiendo un proceso dependiente de CaM, posiblemente la fosforilación mediada por proteínas quinasas dependientes de CaM.
Efecto del Verapamil sobre la liberación de neurotransmisores en terminales nerviosas aisladas
(1988) Sitges, María; Chiu, Luz Ma.; De la Fuente, Juan Ramón; Laboratorio de Neuroquímica, División de Investigaciones Clínicas del Instituto Mexicano de Psiquiatría. Calz. México-Xochimilco 101, Tlalpan, México 14370, D.F.
Los llamados "antagonistas orgánicos de Ca2+, entre los que se encuentran el verapamil y la nitrendipina, se unen con alta afinidad a las membranas cerebrales y a las terminales nerviosas aisladas de cerebro de manífero o sinaptosomas. Adicionalmente, hay estudios que indican que el verapamil es potencialmente útil en la profilaxis de ciertos desórdenes afectivos. Como los sinaptosomas constituyen la unidad anatómica desde donde se liberan los neurotransmisores, en este trabajo se caracterizan los efectos de la nitrendipina, y principalmente del verapamil sobre la liberación de los neurotransmisores ácido-ó-aminobutítico (GABA) y dopamina, en sinaptosomas. A concentraciones micromolares, tanto la nitrendipina como el verapamil inhiben la liberación de GABA inducida por veratrina independientemente de la presencia de Ca2+ externo. Los efectos del verapamil sobre la liberación basal y estimulada de GABA y de dopamina son opuestos: El verapamil estimula la liberación basal de dopamina mientras que no modifica la liberación basal de GABA. La liberación de dopamina estimulada con ceratrina se facilita en presencia de verapamil. Contrariamente, el verapamil inhibe la liberación de GABA estimulada con veratrina. La liberación de dopamina radioactiva estimulada por homorecambio con dopamina fría, no se inhibe con verapamil pero sí se inhibe con bupropion, un inhibidor selectivo de la recaptura de dopamina. Los hallazgos de este estudio no indican que los efectos de estos "antagonistas de Ca2+" sobre la liberación de los neurotransmisores estén precisamente relacionados con sus acciones antagónicas de Ca2+. Las alteraciones moleculares subyacentes a los efectos sobre la liberación de neurotransmisores en respuesta a la interacción de los llamados "antagonistas orgánicos de Ca2+" con las terminales nerviosas aún esperan ser elucidadas.
Los efectos del verapamil sobre la liberación de gaba y de dopaminano involucran a los canales de calcio sensibles a voltaje
(1990) Sitges, María; Chiu, Luz Ma.; De la Fuente, Juan Ramón; Instituto Mexicano de Psiquiatría y Programa Universitario de Investigación en Salud, UNAM.
El efecto del verapamil, que pertenece al grupo de drogas colectivamente conocidas como "antagonistas orgánicos de los canales de calcio (Ca2+ )" se investigó sobre la liberación basal y estimulada de los neurotransmisores: GABA y dopamina en sinaptosomas de estriado de rata. El verapamil no modificó la liberación basal de GABA pero estimuló de manera dependiente de dosis la liberación basal de dopamina (DE50 5µM). Este efecto del verapamil sobre la liberación basal de dopamina no se modificó en ausencia de CA2+ externo ni en presencia de tetrodotoxina, indicando que no involucra receptores de la membrana presináptica que influencien a los canales de CA2+ ni a receptores que influencien a los canales de Na+ sensibles a voltaje. El verapamil también facilitó la liberación de dopamina estimulada con K+ alto o con veratridina. Como el verapamil, el pimozide, un neuroléptico del tipo de las difenilbutilpiperidinas, aumenta la liberación basal y estimulada de dopamina. Nosotros concluimos que ninguna de estas acciones del verapamil (y del pimozide) sobre la liberación basal de o sobre la liberación estimulada de GABA y de dopamina está relacionada con un bloqueo de los canales de Ca2+ sensibles a voltaje de la membrana presináptica.
Toxinas naturales como "herramientas experimentales" en neurobiología
(1986) Sitges, María; Possani, Lourival; Bayón, Alejandro; Unidad de Desarrollo de Técnicas Analíticas para la Investigación en Psiquiatría y Neuroquímica, IMP-UNAM
El veneno del alacrán mexicano Centruroides noxius contiene varios péptidos neurotóxicos cuyas secuencias de aminoácidos han sido determinadas. En este estudio se describen los mecanismos de acción subyacentes a la liberación de un neuro transmisor clásico (GABA) de sinaptosomas de cerebro de ratón, evocada por 3 péptidos neurotóxicos de C. noxius: II-9, II-10 y II-11. La liberación de GABA inducida por los péptidos "largos" (P. M. 7 000) II-9 y II-10, cuyas secuencias de aminoácidos exhiben alta homología, es inhibida por el bloqueador de los canales de Na+ sensibles a voltaje, tetrodotoxina. En contraste, la liberación evocada con el péptido "corto" (P. M. 4 000) II-11, conocido como noxiustoxina (NTX), no se bloquea con tetrodotoxina. La liberación del transimisor, inducida por cualquiera de las 3 neurotoxinas, es inhibida con bloqueadores de los canales de calcio (verapamil, cobalto) y depende de Ca2+ externo. En sinaptosomas, los dos péptidos "largos" aumentan la permeabilidad al 22Na+ y el II-11 o NTX disminuye la permeabilidad al 86Rb+. La NTX, al igual que el bloqueador de los canales de K+, 4-aminopiridina, no evoca liberación de GABA de sinaptosomas previamente tratados con el inóforo de K+ valinomicina. Con base en estos resultados, se propone que la liberacióndel transmisor evocada con NTX, está mediada por una despolarización en respuesta a la disminución de la permeabilidad al K+ y la evocada por las toxinas II-9 ó II-10 por una despolarización como resultado del aumento en la permeabilidad al Na+. La dependencia de Ca2+externo que exhiben las 3 toxinas para inducir liberación es secundaria y se relaciona con la activación de los canales de Ca2+ como consecuencia de la despolarización. Se discute el valor de las toxinas naturales como "herramientas experimentales" y se reafirma la alta potencia y selectividad con que actúan.